一、 操作室厭氧環(huán)境形成

1.按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內(nèi)放入二個無毒塑料袋。

2.通電源開照明燈，開控溫儀，調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度。

3.操作室內(nèi)放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑（封閉）。

4.關(guān)緊取樣室內(nèi)外門，并抽真空校驗。

5.操作室內(nèi)**次置換（氮?dú)庵脫Q）：

（1）先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口，另一頭插入塑料袋。

（2）接通氮?dú)膺M(jìn)氣路，打開氮?dú)饪刂崎y，使二只塑料袋充足氮?dú)?，然后扎緊袋口。

（3）把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。

（4）把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸地放于操作室內(nèi)，**全部放出。

6.操作室第二次置換（氮?dú)庵脫Q）重復(fù)一 次充氮過程，并注意隨時用腳踏開關(guān)開閉排氣。

7.操作室第三次置換（混合氣體置換）：

（混合氣體配比為：N2:H2:CO2=85%:10%:5%）

（1）調(diào)換氣路打開混合氣道通閥門進(jìn)氣，充氣時要隨時腳踏開關(guān)開閉排氣。

（2）混合氣充滿塑料袋后，關(guān)掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經(jīng)過流量計輸入操作并調(diào)整流量計，流量為每分鐘10毫升左右。

（3）把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。

（4）通過三次換氣后，操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。

8.操作室內(nèi)打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧，一 小時后打開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。

9.開紫外線滅菌燈，室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時間自定。

二、 菌種的置入和培養(yǎng)

1.檢查取樣室內(nèi)門并關(guān)緊。

2.打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門。

3.取樣室充氮置換三次過程：先抽真空度500毫米汞柱（66Kpa）以上停,然后人工打開氮?dú)忾y門進(jìn)氣,使指針回復(fù)零位后進(jìn)行下次操作。

4.如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)。

5.取樣室內(nèi)外門開啟，關(guān)緊要抽低真空度100毫米汞柱（13Kpa）檢驗及幫助操作。

6.厭氧培養(yǎng)箱需要長期連續(xù)使用的條件：

（1）每天在操作室內(nèi)打開美蘭指示劑觀察，正常情況下使用。如不正常就必須重新?lián)Q氣。

（2）要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補(bǔ)進(jìn)的氫氣能和微量的氧結(jié)合通過催化吸收，保證了室內(nèi)厭氧狀態(tài)，補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘10毫升左右。

（3）連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行一 天，更換一 次除氧劑和干燥劑。

7.接種棒滅菌器的應(yīng)用：

（1）隨時用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進(jìn)行殺菌（接種棒）

（2）熔蠟處可直接放上，試管封蠟口旋轉(zhuǎn)熔蠟。

8.操作室里的培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度可任意選擇和控制。

9.混合氣瓶、氮?dú)馄枯敵鰤毫φ{(diào)整：調(diào)節(jié)減壓閥，使輸出壓力為0.1Mpa左右。